Шингэн хроматографийн аргаар тоон шинжилгээний зарчим, арга

Шингэн хроматографийн салгах механизм нь хоёр фазын хольц дахь бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн ойр дотно байдлын ялгаан дээр суурилдаг.

Хөдөлгөөнгүй үе шатуудаас хамааран шингэн хроматографийг шингэн-хатуу хроматографи, шингэн-шингэн хроматографи, холбогдсон фазын хроматографи гэж хуваадаг.Хамгийн өргөн хэрэглэгддэг нь цахиурын гель бүхий шингэн-хатуу хроматографи, матриц болгон микроцахиуртай холбогдсон фазын хроматографи юм.

Хөдөлгөөнгүй фазын хэлбэрийн дагуу шингэн хроматографийг баганын хроматографи, цаасан хроматографи, нимгэн давхаргын хроматографи гэж хувааж болно.Шингээх чадварын дагуу адсорбцийн хроматографи, хуваалтын хроматографи, ион солилцооны хроматографи, гель нэвчүүлэх хроматографи гэж хуваагдана.

Сүүлийн жилүүдэд шингэний баганын хроматографийн системд өндөр даралтын шингэний урсгалын системийг нэмж, хөдөлгөөнт фазыг өндөр даралтын дор хурдан урсгаж, салгах нөлөөг сайжруулсан тул өндөр үр ашигтай (өндөр даралт гэж нэрлэдэг) шингэний хроматограф. гарч ирсэн.

ХЭСЭГ
01 Шингэн хроматографийн тоон шинжилгээний зарчим

Чанарын үндсэн дээр тоон үзүүлэлтийг тодорхойлохын тулд стандартын хувьд цэвэр бодис шаардлагатай;

Шингэн хроматографийн тоон үзүүлэлт нь харьцангуй тоон арга юм: өөрөөр хэлбэл хольц дахь шинжлэгдэх бодисын хэмжээг тодорхой хэмжээний цэвэр стандарт дээжээс тооцдог.

ХЭСЭГ
02 Шингэн хроматографийн аргаар тоо хэмжээг тодорхойлох үндэслэл

Хэмжсэн бүрэлдэхүүн хэсгийн хэмжээ (W) нь хариуны утгатай (A) пропорциональ байна (оргил өндөр эсвэл оргил талбай), W=f×A.

Тоон залруулгын коэффициент (f): Энэ нь тоон тооцооны томъёоны пропорциональ тогтмол бөгөөд түүний физик утга нь нэгжийн хариу урвалын утга (оргил талбай) -аар илэрхийлэгдсэн хэмжсэн бүрэлдэхүүн хэсгийн хэмжээ юм.

Тоон залруулгын коэффициентийг стандарт дээжийн мэдэгдэж буй хэмжээ болон түүний хариу урвалын утгаас авч болно.

Үл мэдэгдэх бүрэлдэхүүн хэсгийн хариу утгыг хэмжиж, бүрэлдэхүүн хэсгийн хэмжээг тоон залруулгын хүчин зүйлээр олж авч болно.

ХЭСЭГ
03 Тоон шинжилгээний нийтлэг нэр томъёо

Дээж (дээж): хроматографийн шинжилгээнд зориулсан шинжлэгч бодис агуулсан уусмал.Стандарт болон үл мэдэгдэх дээжинд хуваагдана.

Стандарт: Тодорхой концентрацитай цэвэр бүтээгдэхүүн.Үл мэдэгдэх дээж (мэдэхгүй): Концентрацыг нь шалгах хольц.

Дээжний жин: Шинжилгээнд хамрагдах дээжийн анхны жин.

Шингэрүүлэх: Үл мэдэгдэх дээжийн шингэрүүлэлтийн коэффициент.

Бүрэлдэхүүн хэсэг: тоон шинжилгээнд хамрагдах хроматографийн оргил, өөрөөр хэлбэл агуулга нь тодорхойгүй аналитик.

Бүрэлдэхүүн хэсгийн хэмжээ (хэмжээ): турших бодисын агууламж (эсвэл концентраци).

Бүрэн байдал: Хроматографийн оргилын оргилын талбайг компьютерээр хэмжих тооцооллын процесс.

Шалгалт тохируулгын муруй: Шинжлэх бодисын үл мэдэгдэх агуулгыг тодорхойлоход ашигладаг стандарт бодисын мэдэгдэж буй хэмжээгээр үүсгэсэн бүрэлдэхүүн хэсгийн агууламж ба хариу урвалын утгын шугаман муруй.

ХЭСЭГ
04 Шингэн хроматографийн тоон шинжилгээ

1. Тоон шинжилгээнд тохирох хроматографийн аргыг сонгоно уу:

l Илрүүлсэн бүрэлдэхүүн хэсгийн оргилыг баталгаажуулж, 1.5-аас их нарийвчлалтай (R) хүрнэ үү.

l Туршилтын бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн хроматографийн оргилуудын тууштай байдлыг (цэвэршилт) тодорхойлно

l Аргын илрүүлэх хязгаар ба тоон хязгаарыг тодорхойлох;мэдрэмж ба шугаман хүрээ

2. Янз бүрийн концентрацитай стандарт дээжээр тохируулгын муруй байгуулна

3. Тоон аргын нарийвчлал, нарийвчлалыг шалгах

4. Дээж цуглуулах, мэдээлэл боловсруулах, үр дүнг тайлагнахын тулд харгалзах хроматографийн удирдлагын программ хангамжийг ашиглана

ХЭСЭГ
05 Тоон оргилуудыг тодорхойлох (чанарын)

Хроматографийн оргил бүрийг чанарын хувьд тодорхойлох

Эхлээд стандарт дээжийг ашиглан хэмжигдэх хроматографийн оргилыг хадгалах хугацааг (Rt) тодорхойлно.Хадгалах хугацааг харьцуулж, үл мэдэгдэх дээжин дэх хроматографийн оргил бүрт тохирох бүрэлдэхүүн хэсгийг ол.Хроматографийн чанарын арга нь хадгалах хугацааг стандарт дээжтэй харьцуулах явдал юм.Шалгуур хангалтгүйнэмэлт баталгаажуулалт (чанарын)

1. Стандарт нэмэх арга

2. Бусад аргуудыг нэгэн зэрэг ашиглах: бусад хроматографийн аргууд (механизмыг өөрчлөх, тухайлбал: өөр хроматографийн багана ашиглах), бусад детектор (PDA: спектрийн харьцуулалт, спектрийн номын сангийн хайлт; MS: масс спектрийн шинжилгээ, спектрийн номын сангийн хайлт)

3. Бусад хэрэгсэл, арга

ХЭСЭГ
06 Тоон оргилын тууштай байдлын баталгаа

Хроматографийн дээд тууштай байдлыг баталгаажуулах (цэвэр байдал)

Хроматографийн оргил бүрийн доор зөвхөн нэг хэмжсэн бүрэлдэхүүн хэсэг байгаа эсэхийг шалгаарай

Хамт ялгардаг бодис (бохирдол) -ын хөндлөнгийн оролцоог шалгах

Хроматографийн оргилын тууштай байдлыг (цэвэр байдал) баталгаажуулах аргууд

Спектрограммыг фотодиод матриц (PDA) илрүүлэгчтэй харьцуулах

Оргил цэвэршилтийг тодорхойлох

2996 Цэвэр өнцгийн онол

7-р ХЭСЭГ-т түгээмэл хэрэглэгддэг тоон аргууд

Стандарт муруй аргыг гадаад стандарт арга ба дотоод стандарт арга гэж хуваана.

1. Гадаад стандарт арга: шингэн хроматографид хамгийн их ашиглагддаг

Стандарт дээж болгон турших нэгдлүүдийн цэвэр дээжийг ашиглан тодорхой концентрацийн стандарт дээжийг бэлтгэсэн.баганад түүний хариуны утга (оргил талбай) хүртэл тарина.
Тодорхой хязгаарт стандарт дээжийн концентраци болон хариу урвалын утга W= f×A хооронд сайн шугаман хамаарал байгаа бөгөөд стандарт муруй үүснэ.

Туршилтын яг ижил нөхцөлд үл мэдэгдэх дээжийг шахаж хэмжих бүрэлдэхүүн хэсгийн хариу утгыг авна.Мэдэгдэж буй коэффициентийн дагуу f , хэмжиж буй бүрэлдэхүүн хэсгийн концентрацийг авч болно.

Гадны стандарт аргын давуу талууд:энгийн ажиллагаа, тооцоолол, энэ нь түгээмэл хэрэглэгддэг тоон арга юм;бүрэлдэхүүн хэсэг бүрийг илрүүлж, ялгах шаардлагагүй;стандарт дээж шаардлагатай;стандарт дээж болон үл мэдэгдэх дээжийн хэмжилтийн нөхцөл нь нийцтэй байх ёстой;тарилгын хэмжээ нарийн байх ёстой.

Гадны стандарт аргын сул талууд:Туршилтын нөхцөл нь мэдрэгчийн мэдрэмж, урсгалын хурд, хөдөлгөөнт фазын бүрэлдэхүүнийг өөрчлөх боломжгүй зэрэг өндөр байх шаардлагатай;тарилга бүрийн хэмжээ сайн давтагдах чадвартай байх ёстой.

2. Дотоод стандарт арга: үнэн зөв, гэхдээ асуудалтай, стандарт аргуудад ихэвчлэн ашиглагддаг

Холимог стандарт гаргахын тулд дотоод стандартын мэдэгдэж буй хэмжээг стандартад нэмж, тодорхой агууламжтай хэд хэдэн ажлын стандартыг бэлтгэдэг.Холимог стандарт дахь стандарт ба дотоод стандартын молийн харьцаа өөрчлөгдөөгүй хэвээр байна.Хроматографийн баганад тарьж, хариуны утга болгон (стандарт дээжийн оргил хэсэг/дотоод стандарт дээжийн оргил хэсэг) авна.Хариултын утга ба ажлын стандартын концентрацийн хоорондын шугаман хамаарлын дагуу W= f×A , стандарт муруй хийгдэнэ.

Тодорхойгүй хэмжээний дотоод стандартыг үл мэдэгдэх дээжинд нэмж, хэмжих бүрэлдэхүүн хэсгийн хариу утгыг авахын тулд баганад шахдаг.Мэдэгдэж буй коэффициентийн дагуу f , хэмжих бүрэлдэхүүн хэсгийн концентрацийг авч болно.

Дотоод стандарт аргын шинж чанарууд:Ашиглалтын явцад дээж болон дотоод стандартыг хооронд нь хольж хроматографийн баганад шахдаг тул холимог уусмал дахь хэмжсэн бүрэлдэхүүн хэсгийн хэмжээ, дотоод стандартын харьцаа тогтмол байвал дээжийн эзэлхүүний өөрчлөлт. тоон үр дүнд нөлөөлөхгүй..Дотоод стандарт арга нь дээжийн хэмжээ, тэр ч байтугай хөдөлгөөнт фаз, детекторын нөлөөллийг нөхдөг тул гадаад стандарт аргаас илүү нарийвчлалтай байдаг.

ХЭСЭГ
08 Тоон шинжилгээний үр дүнд нөлөөлөх хүчин зүйлс

Нарийвчлал муу байгаа нь дараахь шалтгаанаас үүдэлтэй байж болно.

Оргил талбайн буруу нэгдэл, дээж бэлтгэх явцад задрал, хольц орсон, дээжийн шил битүүмжлээгүй, дээж эсвэл уусгагч дэгдэмхий байдал, дээжийг буруу бэлтгэсэн, дээжийг тарьсан асуудал, дотоод стандартын буруу бэлтгэл.

Нарийвчлал муутай байж болох шалтгаанууд:

Буруу оргил интеграци, тарилга эсвэл инжекторын асуудал, дээж бэлтгэх явцад үүссэн дээж задрах эсвэл хольц, хроматографийн асуудал, детекторын хариу урвал муудсан.